Thermo Scientific™ Trascrittasi inversa Maxima™ H Minus

Descrizione

La trascrittasi inversa (RT) Thermo Scientific Maxima H Minus è stata sviluppata mediante l'evoluzione in vitro della M-Mu LV RT. L'enzima possiede un'attività polimerasica RNA-dipendente e DNA-dipendente ma sono assenti attività dell'RNasi H a causa della mutazione nel dominio RNasi H della M-Mu LV RT. Le caratteristiche dell'enzima ingegnerizzato migliorano considerevolmente la termostabilità, aumenta di 50 volte la processività, la robustezza e la velocità di sintesi rispetto alla M-Mu LV RT di tipo 'wild'.
L'eliminazione dell'attività dell'RNasi H consente all'enzima di produrre trascrizioni di RNA molto lunghe fino a 20 kb. Grazie alla sua elevata termostabilità, l'enzima mantiene l'attività totale per tutta la reazione di trascrizione inversa e genera produttività elevate di cDNA. La temperatura di reazione può essere aumentata fino a 65 °C per una trascrizione efficiente delle regioni di RNA con struttura secondaria elevata o per migliorare la specificità utilizzando primer genospecifici. La processività estremamente elevata dell'enzima Maxima H Minus produce un aumento della resistenza agli inibitori della reazione più comuni, quali guanidina, formammide ed etanolo.

Caratteristiche principali

• Termostabile: 90% di attività dopo l'incubazione a 50 °C per 60 minuti in una miscela di reazione.
• Attivo fino a 65 °C
• Rese elevate di cDNA di lunghezza intera fino a 20 kb
• Sensibilità elevata: sintesi del cDNA riproducibile da una vasta gamma di quantità di RNA iniziale totale (da 1 pg a 5 μg)
• Efficiente: sintesi del cDNA in 15 - 30 minuti
• Maggiore resistenza agli inibitori della reazione più comuni
• Incorpora nucleotidi modificati

Applicazioni

• Sintesi del primo filamento di cDNA per RT-PCR e RT-PCR in tempo reale
• Trascrizione inversa a temperature elevate per la riduzione degli effetti della struttura secondaria.
• Sintesi di cDNA per clonaggio ed espressione.
• Generazione di sonde di cDNA marcato per microarray.
• Analisi di RNA mediante estensione del primer.

Comprende
La trascrittasi inversa Maxima H Minus viene fornita con 5X tamponi RT (DTT 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 a 25 °C), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2, 50 mM).

Nota
Sono inoltre disponibili: Kit di sintesi di cDNA a singolo filamento Maxima H Minus

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